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    产品名称:

    pK19mobSacB-T7 polymerase原核载体

     
    产品编号: YM2637 
    pK19mobSacB-T7 polymerase原核载体
    产品名称:pK19mobSacB-T7polymerase原核载体
    规格:0.5-2ug质粒干粉
    货号:YM2637

    基本信息:
    别名:T7polymerase
    原核抗性:卡那霉素Kan
    筛选标记:自杀基因SacB
    克隆菌株:大肠杆菌DH5α
    培养条件:LB培养基/37℃

    质粒图谱



    扩增流程:
    收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
    1、质粒干粉(请务必转化挑单克隆重提后使用)
    ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒;
    ②取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
    (从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
    ③加入500μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
    ④取10μl、100μl复苏液,并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
    (可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
    ⑤将平板正向培养1h,再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h;
    (如果菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果无菌落,请加入10μl质粒离心全涂转化)
    ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

    2、甘油菌:四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
    3、穿刺菌:穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
    4、平板:直接挑取单菌落至液体培养基中。
    5、液体质粒:单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
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